1適用范圍

　　適用于無塵車間沉降菌，浮游菌工作臺面，工人手的微生物檢測工作。

　　2定義

　　2.1浮游菌：懸浮在空氣中的活的微生物粒子，使用專.用的儀器，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌活數(shù)。

　　2.2沉降菌：空氣中的活的微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌活數(shù)。

　　2.3CFU：菌落形成單位colony-formingunit。

　　3測試方法

　　3.1試劑/培養(yǎng)基的配制

　　3.1.1根據(jù)采樣數(shù)量，按規(guī)定要求配制好0.9%生理鹽水和大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，將配制好的培養(yǎng)基分裝到三角瓶中膠塞密封并用白紙包好；用移液管分裝0.9%生理鹽水10ml至試管中膠塞密封并用白紙包好，將相應(yīng)數(shù)量移液管，棉拭子包好；將平皿放入不銹鋼消.毒筒中，所有物品經(jīng)121℃高壓蒸氣滅.菌15min；

　　3.1.2滅.菌結(jié)束后部分培養(yǎng)基倒平皿，將用于檢測浮游菌、沉降菌，如非當(dāng)日使用需在2~8℃低溫保存。將部分培養(yǎng)基置于45±5℃的恒溫水浴中，生理鹽水管待冷卻后可到無塵車間進(jìn)行采樣；

　　3.2沉降菌采樣步驟如下：

　　3.2.1將培養(yǎng)基凝固了的培養(yǎng)皿按采樣位置作好標(biāo)記；

　　3.2.2布置采樣點時，應(yīng)盡量避開塵粒較集中的回風(fēng)口；

　　3.2.3將培養(yǎng)皿放置在離地0.8～1.5m左右的工作臺面上，揭開培養(yǎng)皿蓋子，使培養(yǎng)基暴露在空氣中采樣30min；

　　3.2.4全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿蓋上并倒置。

　　3.2.5培養(yǎng)皿在用于檢測時，為避免培養(yǎng)皿運輸或搬動過程造成的影響，應(yīng)同時進(jìn)行陰性對照試驗，每次或每個區(qū)域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長。

　　3.3浮游菌采樣步驟如下：

　　3.3.1采樣前，先用消.毒劑消.毒采樣器的頂蓋，轉(zhuǎn)盤及罩子的內(nèi)外面；

　　3.3.2開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消.毒劑蒸發(fā)，時間不少于5min，并檢查流量并根據(jù)采樣量調(diào)整設(shè)定采樣參數(shù)，每個采樣點采樣不少于500L；

　　3.3.3布置采樣點時，采樣點位置應(yīng)離地0.8～1.5m左右，送風(fēng)口測點位置應(yīng)離開送風(fēng)面30cm左右；

　　3.3.4用消.毒劑對手進(jìn)行消.毒后，將培養(yǎng)皿放入轉(zhuǎn)盤內(nèi)，蓋上多孔取樣頭蓋子，揭開保護(hù)蓋，開啟浮游菌采樣器進(jìn)行采樣；

　　3.3.5采樣結(jié)束后，對已采樣的培養(yǎng)皿作上標(biāo)記；

　　3.3.6全部采樣結(jié)束后，用消.毒劑輕輕噴射儀器內(nèi)罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤；

　　3.3.7培養(yǎng)皿在用于檢測時，為避免培養(yǎng)皿運輸或搬動過程造成的影響，應(yīng)同時進(jìn)行陰性對照試驗，每次或每個區(qū)域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長。

　　3.4工人手微生物采樣按以下步驟進(jìn)行：

　　3.4.1將滅.菌生理鹽水管作好標(biāo)記；

　　3.4.2用消.毒劑對手進(jìn)行消.毒，取出滅.菌棉拭子，打開滅.菌生理鹽水管塞子，將棉拭子浸入滅.菌生理鹽中，待棉拭子濕透后，在試管壁上輕壓數(shù)下，除.去過多的水分；

　　3.4.3要求被檢人五指并攏，將浸有滅.菌生理鹽水的棉拭子在手上來回涂擦10次，將整個手掌面積涂抹到；

　　3.4.4將棉拭子與手接觸的部份去掉，棉拭子頭掉入滅.菌生理鹽水管中，送檢；

　　3.4.5每對一個采樣點采樣結(jié)束后，應(yīng)用消.毒劑對手剪鉗和手進(jìn)行消.毒。

　　3.4.6采樣結(jié)束后，另取一根棉拭子，將與手接觸部分去掉，棉拭子頭掉入滅.菌生理鹽水管中作陰性對照。

　　3.5工作臺面微生物采樣按以下步驟進(jìn)行：

　　3.5.1先將滅.菌生理鹽水管標(biāo)記好標(biāo)記號，與所取的工人手相對應(yīng)；

　　3.5.2實驗員帶上無菌手套，用消.毒劑將手，定位架進(jìn)行消.毒，必要時用酒精燈燒灼定位架，加速酒精揮發(fā)；

　　3.5.3選定采樣位置，固定好定位架；

　　3.5.4取出滅.菌棉拭子，打開滅.菌生理鹽水管塞子，將棉拭子浸入滅.菌生理鹽中，待棉拭子濕透后，在試管壁上輕壓數(shù)下，去.除過多的水分；

　　3.5.5用棉拭子在定位架內(nèi)來回涂抹10次；

　　3.5.6將棉拭子與手接觸的部份去.除，棉拭子頭掉入滅.菌生理鹽水管中，送檢；

　　3.5.7每一個采樣點采樣結(jié)束后，應(yīng)用消.毒劑對手，定位架和剪鉗進(jìn)行消.毒。

　　采樣結(jié)束后，另取一根棉拭子，將與手接觸部分去.除，棉拭子頭掉入滅.菌生理鹽水管中作陰性對照。

　　3.6采樣后的微生物檢測

　　3.6.1以培養(yǎng)皿采樣的，將培養(yǎng)皿倒置，于34±1℃培養(yǎng)24～48小時，計數(shù)；

　　以采樣管采樣的，將采樣管在超聲波清洗機(jī)超聲5min，混勻后在潔凈工作臺上將已稀釋成10倍數(shù)濃度的稀釋液；用已滅.菌的移液管吸取1ml稀釋液注入無菌平皿中，立即傾注培養(yǎng)基、混勻、凝固，每個稀釋度傾注2塊平板，倒置34±1℃培養(yǎng)24～48小時，計數(shù)；

　　3.7結(jié)果判定

　　3.7.1工作臺面菌量應(yīng)≦10cfu/cm2（即≦250cfu/25cm2）；

　　3.7.2工人手菌量應(yīng)≦300cfu/hand；

　　3.7.3沉降菌數(shù)100000級應(yīng)≦10個/皿；

　　浮游菌濃度100000級應(yīng)≦500個/m3(≦125個/250L)；